fa کلونینگ و بیان پروتئین نوترکیب فلاژلین FlaA ویبریو کلرا و بررسی خواص آنتی ژنیکی آن علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: ویبریو کلرا عامل بیماری کلرا در انسان می‎باشد. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن FlaA یکی از پنج ژن کد کننده فلاژلین می‎باشد که نقش اصلی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه می‎باشد. در این مطالعه کلونینگ و بیان ژن FlaA در باکتری اشرشیاکلی و بیان پروتئین نوترکیب با روش وسترن بلات تائید می‎شود. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی با PCR تکثیر و با آنزیم‎های BamHI و XhoI در وکتور pTZ57R/T کلون و در E.coli سویهDH5α تکثیر و تعیین توالی شد. در وکتور PGEX4T-1و در E.coli سویه BL21- DE3با القا IPTG بیان شد. از کیتG.S.T جهت خالص سازی پروتئین نوترکیب استفاده شد و پروتئین به موش تزریق و آنتی بادی اختصاصی سنتز شده در موش برای تایید نهایی پروتئین نوترکیب در وسترن بلات مورد استفاده گرفت. یافته‎ها: تعیین توالی نشان داد که ژن فوق بدرستی تکثیر شده است و آنتی بادی استفاده شده در وسترن بلات، تولید پروتئین نو ترکیب را نشان داد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب flaA در میزبان E.coli با مقدار مناسب بیان گردید. تزریق پروتئین تولید شده به موش نشان داد که این پروتئین ضمن داشتن خاصیت آنتی ژنی به خوبی آن را حفظ می‎کند. بنابراین می‎توان از آن به عنوان یکی از اجزا موثر در طراحی یک واکسن ایمنی بخش و نیز به عنوان یک ابزار تشخیصی استفاد نمود. Background: Vibrio cholera is an important agent causing cholera in human. The expression of Flagellum and the movement of the bacterium are critical in the colonization and virulence of Vibrio cholera. FlaA gene is one the five genes encoding Flagellin which plays an important role in the activity and movement of the bacterium and its colonization which has a significant role in its immunogenicity. The aim of this study was to express and produce the recombinant FlaA protein in E.coli using Western blot method. Materials and Methods: In this experimental study, FlaA gene was proliferated by PCR method using the specific primers and cloned with BamHI and Xhol in pTz57R/T. Then it was proliferated and sequenced in DH5a vector of E.coli. The cloned FlaA gene was inserted into pGEX-4T-1 vector. The cloned vector was transformed to BL21-DE3 of E. coli and successfully expressed by induction of IPTG. The expressed protein was purified by GST affinity resin. For preparation of the primary antibody, the purified recombinant protein was injected to rats. Western blot assay method was used for determining the antigenicity of the recombinant FlaA. Results: Determination of gene sequencing showed that this gene has been proliferated properly and the antibody used in Western blot verified the production of the recombinant protein. Conclusion: The results of this study demonstrate that FlaA protein is immunogenic and can be evaluated in vaccine designing and as a diagnostic tool for detection of cholera infection. اشرشیاکلی، فلاژلین، بیان ژن، پروتئین نوترکیب، ویبریو کلره E. coli, FlaA, gene expression, recombinant protein, Vibrio cholera 54 62 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1466-1&slc_lang=fa&sid=1 Hamid Kazemian حمید کاظمیان n_mosleh@yahoo.com 4600319475328460020670 4600319475328460020670 Yes Department of Medical Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Arak دانشگاه علوم پزشکی اراک Mohammad Najafi-Mosleh محمد نجفی مصلح habtahi2001@yahoo.com 4600319475328460020671 4600319475328460020671 No department of microbiology, faculty of medicine, Hamadan university of medical science دانشگاه علوم پزشکی همدان Hamid Abtahi حمید ابطحی hamid_8321@yahoo.com 4600319475328460020672 4600319475328460020672 No Department of Medical Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Arak دانشگاه علوم پزشکی اراک