Journal of Arak University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك
J Arak Uni Med Sci
Medical Sciences
http://jams.arakmu.ac.ir
46
journal46
1735-5338
2008-644X
fa
jalali
1391
9
1
gregorian
2012
12
1
15
7
online
1
fulltext
fa
بررسی پروتئین نوترکیب زیر واحد A پیلی ویبریو کلرا در اشرشیاکلی
A study of recombinant Vibrio cholera toxin-coregulated pili A (TCPA) from E.coli
علوم پایه
Basic Sciences
پژوهشي اصیل
Original Atricle
زمینه و هدف: ویبریوکلرا یک باکتری پاتوژن گرم منفی است که عامل بیماری اسهال است. یکی از مهمترین عوامل بیماریزای باکتری، پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است. این پیلی به عنوان اولین عامل در کلونیزاسیون و تداوم باکتریها در روده کوچک مورد نیاز است. مواد وروشها: در این تحقیق با استفاده از روش PCR، ژن پیلی هم تنظیم شونده با توکسین ویبریوکلرا تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژنهای فوق در پلاسمید 1T4pGEX جهت بیان کلون شد. سپس ساختار پلاسمیدی نوترکیب وارد باکتری اشریشیاکلی شد. تولید پروتئینها توسط IPTG القاء و بهینه سازی شرایط محیط کشت صورت گرفت. پروتئینهای نوترکیب با استفاده از کیت گلوتاتیون S سفاروز خالص و آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام گرفت. میزان پروتئینها با استفاده از روش برادفورد اندازهگیری شد. یافتهها: نتایج تحقیق حاضر بیان موفقیت آمیز پروتئینهای نوترکیب در سلول اشرشیاکلی را ثابت کرد. پروتئین نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد. الگوی واکنش این پروتئینها با آنتیبادیهای ضد آنها، نشان داد که این پروتئینها خاصیت آنتیژنیک دارند. نتیجهگیری: از آنجا که در این مطالعه نشان داده شد، این پروتئینها دارای خاصیت آنتی ژنیسیته هستند، ممکن است به عنوان یک آنتی ژن مناسب برای واکسیناسیون باکتری ویبریوکلرا استفاده شود.
Background: Vibrio cholerae is a gram-negative bacterial pathogen that causes diarrheal disease cholera. One of the most pathogenic factors of Vibrio cholera is pili. Pili plays an important role in colonization and persistence of bacteria in small intestine. Materials and Methods: In this study, pili A (tcpA) gene was amplified by Polymerase chain reaction (PCR) method and sub-cloned into expression vectors such as pGEX4T-1. Escherichia coli competent cells were transformed by recombinant plasmids and the expression of protein with IPTG. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography (GST) and immunoblot analysis was used for evaluation of new recombinant proteins antigenicity. The concentration of recombinant proteins was measured according to Bradford assay. Results: The results of this study indicated that recombinant proteins were expressed successfully in competent cell of E. coli, such as E. coli BL21 (DH3). The recombinant protein was purified by affinity chromatography (GST). The immunoreactivity pattern of anti-Tcp antibody with recombinant proteins of TcPA showed that the recombinant proteins had antigenic properties. Conclusion: Because these recombinant proteins are antigenic, these proteins may be considered as tentative candidates for designing cholera vaccine.
واکنش زنجیرهای پلی مراز، ژن پیلی هم تنظیم شونده با توکسینA ، ویبریو کلرا
Polymerase chain reaction (PCR), Toxin-coregulated pili (tcpA), Vibrio cholera
63
71
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-33-9&slc_lang=fa&sid=1
Somayeh
Kiaie
سمیه
کیایی
mahsa_diamond21@yahoo.com
4600319475328460020638
4600319475328460020638
No
Master of bacteriology , Molecular and medicine Research center, Arak University of Medical Sciences, Arak ,Iran
دانشجوی دوره کارشناسی ارشد رشته باکتری شناسی دانشگاه علوم پزشکی اراک
Hamid
Abtahi
حمید
ابطحی
h_abtahi2@yahoo.co.uk
4600319475328460020639
4600319475328460020639
Yes
Molecular and medicine Research center, Arak University of Medical Sciences, Arak ,Iran
مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی اراک
Mohammad
Alikhani
محمد
علیخانی
Alikhani43@yahoo.com
4600319475328460020640
4600319475328460020640
No
medicine Research center, Hamedan University of Medical Sciences, Hamedan ,Iran
گروه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی همدان
Ghassem
Mosayebi
قاسم
مسیبی
gmosayebi@yahoo.com
4600319475328460020641
4600319475328460020641
No
Master of bacteriology , Molecular and medicine Research center, Arak University of Medical Sciences, Arak ,Iran
مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی اراک