fa ساخت باکیلوویروس نوترکیب کد کننده توأم پروتئین‌های هماگلوتینین، نورآمینیداز و ماتریکس ویروس آنفلوانزای H1N1 خوکی و بیان آن در سلول‌های حشرات علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف:تغییرات ژنتیکی ویروس آنفلونزا، هر ساله باعث ایجاد اپیدمی‌های جدید در سراسر دنیا می‌شود. ساخت یک واکسن جدید به منظور پیش‌گیری از ویروس آنفلونزا در چند سال اخیر هدف اصلی پژوهشگران بوده است. هدف ما از این پژوهش،ساختن باکیلوویروس نوترکیبی است که بتواند دو گلیکوپروتئین سطحی آنتی ژنیک هماگلوتینین و نورآمینیداز، به همراه پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزاینوع A را به طور مستقل بیان نماید. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا کاست سه گانه‌ای که بیان هم‌زمان و مستقل سه ژن هماگلوتینی، نورآمینداز و پروتئین ماتریکس را تأمین نماید، طراحی و سنتز شد. این کاست سپس در پلاسمید دهندهpFastBac1 کلون شد تا به پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 دست بیابیم. کلون مذکور در میزبان E.Coli DH10Bac با انجام ترانسپوزیشن همسان، بکمید نوترکیب را ساخت. این سازه پس از تائید با PCR، برای تکوین باکیلوویروس نوترکیب در سلول‌های حشرات SF9 تراریخت شد. یافته‌ها: نتایج هضم آنزیمی، کلونینگ صحیح پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 را تایید نمود. طول صحیح نواحی تکثیر یافته هدف بر روی بکمید نوترکیب،دلیل بر صحت نوترکیبی همسان بین پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 و بکمید موجود در E.Coli DH10Bac بود. آثار ضایعات سلولی SF9 به دنبال تراریختی با بکمید نوترکیب، نشان دهنده تکوین موفق باکیلوویروس نوترکیب بود.آنالیز پروتئین‌های این سلول‌ها نشان داد هر سه پروتئین هدف به طور مؤثر و هم‌زمان بیان یافته‌اند. نتیجه‌گیری: باکیلوویروس نوترکیب ساخته شده در این طرح ویژگی‌های درست جهت قابلیت استفاده در تولید ذرات شبه ویروسی آنفلوانزا ویژه استرین خوکی را دارد. Background: Genetic variability of influenza viruses causes new epidemics worldwide annually. Development of a new vaccine for prophylaxis of influenza virus has been amajor objective in recent years. The aim of this study was to construct a recombinant baculoviruscapable of expressing the two surficial antigenic glycoproteins, hemagglutininand neuraminidase, as well as matrix proteinsof swine influenza (H1N1) simultaneously and independently. Materials and Methods: In this experimental study, first, a triplet cassette providing simultaneous and independent expression of target proteins was designed and subjected to synthesis. It was then cloned into pFastBac1 donor plasmid. Competent E.ColiDH10Bac cells were transformed by donor clone and the recombinant bacmids were produced following homologous transposition. This construction was verified by PCR and then transfected into Sf9 insect cells to package new recombinant baculoviruses. Results: Restriction map of pFastBacI HNM1 donor plasmid confirmed the fidelity of the clone. The results of PCR done on the recombinant bacmidas template indicated that a proper homologous recombination has occurred between pFastBacI HNM1 donor plasmid and the bacmid in E.ColiDH10Bac host cells. Protein analysis of the infected Sf9 cells showed that all target proteins were efficiently expressed at the same time. Conclusion: The recombinant baculovirus constructed in this studypossesses proper characteristics to produce swine influenza virus-like particles in Sf9 cells. باکیلو ویروس، ساب تایپ H1N1، ویروس آنفلونزای تیپA، ذرات شبیه ویروس Baculovirus, H1N1 subtype, Influenza Avirus, Virus-like particle 16 25 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1578-1&slc_lang=fa&sid=1 Farida Behzadian فریدا بهزادیان fbehzadian@yahoo.com 4600319475328460021360 4600319475328460021360 No research senter for sciences and biotechnology پژوهشکده علوم و فن آوری زیستی Zahra Goodarzi زهرا گودرزی goodarzi002@gmail.com 4600319475328460021361 4600319475328460021361 No applied virology research center مرکز تحقیقات کاربردی ویروس شناسی Esmaiel Saberfar اسماعیل صابرفر saberfar@yahoo.com 4600319475328460021362 4600319475328460021362 Yes applied virology research center مرکز تحقیقات کاربردی ویروس شناسی