fa تولید ناحیه آنتی ژنیک vacA هلیکوباکتر پیلوری در اشریشیاکلی علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p style="text-align: justify"><strong>زمینه و هدف</strong>: هلیکوباکترپیلوری شایع‎ترین باکتری است که جوامع انسانی را در بعد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. ژن vacA از مهم‎ترین شاخص‎های بیماری زایی این باکتری می‎باشد که باعث تشکیل واکوئل‎های اسیدی در سیتوپلاسم سلول و نیز تخریب سلول‎های اپیتلیال می‎شود. هدف از این مطالعه بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نوترکیب vacA هلیکوباکترپیلوری در سرم انسان و موش آلوده می‎باشد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>مواد و روش‎ها</strong>: در این مطالعه تجربی، قطعه حاوی ناحیه دارای بالاترین خاصیت آنتی ژنیک ژن vacA به طول bp1233 بر اساس برنامه‎های بیوانفورماتیکی به دست آمد، پس از تکثیر ناحیه مورد نظر با استفاده از PCR، در ناقل پلاسمیدی pET32a کلون و بیان شد. پس از خالص سازی پروتئین نوترکیب، آنتی ژنیسیته آن به روش وسترن بلات با سرم افراد آلوده به عفونت فعال هلیکوباکترپیلوری و موش آلوده شده با پروتئین نوترکیب خالص شده بررسی شد.</p> <p style="text-align: justify"><strong>یافته‎ها</strong>: نتایج PCR و تعیین توالی نشان داد که ژن هدف به درستی در ناقل مورد نظر کلون شده است. آنتی بادی‎های استفاده شده در وسترن بلات تولید و بیان پروتئین نوترکیب (65 کیلو دالتون) با غلظت 1/2 میلی‎گرم در میلی‎لیتر را نشان دادند.</p> <p style="text-align: justify"><strong>نتیجه‎گیری</strong>: تزریق پروتئین تولید شده به موش نشان داد که این پروتئین دارای خاصیت آنتی ژنیک و ایمونوژنیک می‎باشد. بنابراین می‎توان از آن به عنوان کاندید مناسبی برای طراحی کیت‎های تشخیصی و واکسن هلیکوباکترپیلوری استفاده نمود.</p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Background</em></strong>: Helicobacter pylori is the most common bacteria causing chronic infections worldwide. An important virulence factor of H. pylori is a vacuolating cytotoxin (VacA) that induces the formation of acidic vacuoles in cytoplasm and damage to epithelial cells. The aim of this study was to examine the antigenic properties of the recombinant VacA of H. pylori in infected sera of mice and human. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Materials and Methods</em></strong>: In this experimental study, the highly antigenic region of VacA gene (1233 bp) was detected by bioinformatics methods, and it was amplified by PCR method and cloned into the pET32a expression vector. After expression and purification of the target protein, its antigenicity was studied by Western Blotting using human sera infected with H. pylori and sera from immunized mice infected with purified recombinant VacA. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Results</em></strong>: PCR and sequencing results showed that the target gene was correctly cloned into the recombinant vector. Antibodies used in Western Blotting indicated the production and expression of the recombinant protein (65kDa) with concentration of 2.1 mg/ml. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Conclusion</em></strong>: Recombinant VacA protein has antigenic and immunogenic properties thus, it is a proper candidate for designing H. pylori vaccine and diagnostic kits</span></span></p> ناحیه آنتی ژنیک, هلیکوباکترپیلوری, پروتئین نوترکیب, ژن vacA Antigenic region, Helicobacter pylori, Recombinant protein, VacA gene 34 42 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1821-1&slc_lang=fa&sid=1 Leila Hasanzadeh لیلا حسن زاده hasanzadeh.leila@gmail.com 4600319475328460043757 4600319475328460043757 No Department of Biotechnology and Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Hamid Abtahi حمید ابطحی abtahi@arakmu.ac.ir 4600319475328460043758 4600319475328460043758 Yes Department of Microbiology, Molecular and Medical Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات پزشکی و ملکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Ehsanollah Ghaznavi-Rad احسان الله غزنوی راد 4600319475328460043759 4600319475328460043759 No Department of Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروب شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Safieh Soufian صفیه صوفیان 4600319475328460043760 4600319475328460043760 No Department of Biology, Payame Noor University, Arak, Iran گروه بیولوژی، دانشگاه پیام نور، اراک، ایران Vahideh Farjadi وحیده فرجادی 4600319475328460043761 4600319475328460043761 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد قم، قم، ایران