fa همسانه سازی، امتزاج و بررسی بیان کاست ژنی ctB و N ترمینال ipaD در E. coli علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p style="text-align: justify"><strong>زمینه و هدف</strong>: شیگلا دیسانتری یکی از عوامل اصلی بیماری اسهال در انسان بوده که علیه آن واکسن وجود ندارد. یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زای موجود در شیگلا، پروتئین IpaD است. همسانه سازیN ترمینال ژن ipaD به همراه ژن ctBکه دارای نقش ادجوانتی و حاملی می باشد به شکل یک واکسن نوترکیب می‌توان سبب تقویت پاسخ ایمنی مخاطی شود.</p> <p style="text-align: justify"><strong>مواد و روش ها</strong>: طراحی پرایمر برای ژن‌های ipaD و ctB بر مبنای طراحی انجام شده برای ساخت کاست ژنی، صورت گرفت. واکنش PCR برای تکثیر این قطعات انجام و هر یک از قطعات تکثیر شده درون pGEM-Teasy vector همسانه سازی شدند. هر دو وکتور توسط آنزیم های محدودالاثر Hind III و Xho I برش خورده و در نهایت ژن ipaD به ژن ctB ملحق گردید. در ادامه کاست ژنی ctB-ipaD و وکتور بیانی pET28a(+) توسط آنزیم های محدودالاثر SalI و HindIII برش خورده و کاست ctB-ipaD در وکتور بیانی زیر همسانه سازی و بررسی بیان کاست ژنی انجام گرفت.</p> <p style="text-align: justify"><strong>یافته ها</strong>: در این تحقیق، N ترمینال ژن ipaD به عنوان یک آنتی ژن کاندید واکسن ژنی به ناحیه C ترمینال ژنctB که دارای نقش ادجوانتی و حاملی می‌باشد، متصل گردید. ژن های ممزوجی ctB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) توسط PCR و هضم به وسیله آنزیم‌های با اثر محدود تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن تایید گردید.</p> <p style="text-align: justify"><strong>نتیجه گیری</strong>: با توجه به مطالعات گذشته و مشابه، ایجاد کاست ژنی ctB-ipaD و بررسی بیان آن، هدف مورد انتظار این تحقیق بود. امید می رود با بیان پروتئین این کاست ژنی و در صورت تولید آنتی بادی مناسب بتوان به کاندید واکسن علیه شیگلا دست یافت.</p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Background</em></strong>: Shigella dysenteriae one of the main causes of diarrhea in humans, but there is no vaccine against it. IpaD protein is one of the most important virulence factors in pathogenic shigella. The cloning N-terminal ipaD genes with ctB genes that have a role in adjuvant and carrier as recombinant vaccine can caused enhance the mucosal immune response. </span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Materials and Methods</em></strong>: Designing primers for genes ctB and ipaD were carried out based on the construction of gene cassettes, respectively. PCR reactions were performed to amplify the fragments and amplified fragments were cloned into pGEM-Teasy vector. Both the vector cut by restriction enzymes HindIII and XhoI and ipaD gene to gene ctB finally were Fusion. The ctB-ipaD gene cassette and expression vector pET28a(+) cuted by SalI and HindIII restriction enzymes. The cloning ctB-ipaD cassette was performed in the expression vector and expression of gene cassettes.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Results</em></strong>: In this study, the N-terminal ipaD as vaccine candidate antigen was genetically linked to the C terminal of ctB which has a carrier and adjuvant role. Fusing ctB-ipaD in the expression vector pET28a(+) is confirmed by sequencing, PCR and digested with restriction enzymes. The recombinant proteins produced is confirmed by SDS-PAGE and Western blot.</span></span></p> <p style="text-align: justify"><span style="font-size: 14px"><span style="font-family: times new roman"><strong><em>Conclusion</em></strong>: According to previous and similar studies, product cassette ctB-ipaD and expression its was expected. Is hoped to protein expression of this gene cassette and the production of antibodies could be achieved the candidate vaccine against Shigella.</span></span></p> واژه‌های کلیدی: ادجوانت, ctB, شیگلوز, ipaD, فیوژن, همسانه سازی. Adjuvant, Cloning, CtB gene, Fusion gene, IpaD gene, Shigellosis 96 109 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2170-2&slc_lang=fa&sid=1 Hossien Honari حسین هنری Honari.hosein@gmail.com 4600319475328460045076 4600319475328460045076 Yes Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Mahdi Ghofrani Ivari مهدی غفرانی ایوری 4600319475328460045077 4600319475328460045077 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Mojtaba Saadati مجتبی سعادتی 4600319475328460045078 4600319475328460045078 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Mohammad Ebrahim Minaei محمد ابراهیم مینایی 4600319475328460045079 4600319475328460045079 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران