fa ارزیابی ایمنی زایی توالی تکرار سه تایی ناحیه خارج سلولی پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا همراه با ادجوانت در مدل موش بالب سی علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p align="right"></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>زمینه و هدف:</strong> ویروس‌های آنفلوانزا یکی از مهم‌ترین عوامل بروز عفونت‌های تنفسی می‌باشند که باعث بیماری و مرگ و میر بسیار در طی اپیدمی‌های سالیانه می‌گردند. پروتئین <span dir="ltr">M2</span> در سطح ذره ویروس آنفلوانزا، ورود ویروس به سلول‌های میزبان را تسهیل می‌کند. بخش خارج سلولی این پروتئین که واجد 24 اسید امینه است، در اکثر نژاد‌های آنفلوانزای نوع <span dir="ltr">A</span> انسانی حفاظت شده می‌باشد. در این مطالعه، ایمنی‌زایی توالی سه تایی <span dir="ltr">M2e</span> به همراه ادجوانت‌های مختلف در مدل موشی ارزیابی گردید.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>مواد و روش</strong>‌<strong>ها:</strong> پروتئین نوترکیب <span dir="ltr">(3M2e)</span> پس از بیان در اشرشیاکلی تخلیص شد. موش‌های بالب سی شش هفته‌ای با پروتئین تخلیص شده به تنهایی و یا همراه با ادجوانت <span dir="ltr">Alum-CpG</span> در سه دوزبه صورت زیرجلدی واکسینه شدند. موش‌های شاهد، بافر فسفات دریافت کردند. دو هفته بعد از آخرین ایمن سازی، آنتی بادی اختصاصی <span dir="ltr">M2</span> در سرم موش‌ها به وسیله تست الایزا بررسی گردید و در نهایت حیوانات با یک دوز کشنده <span dir="ltr">LD90</span> ویروس <span dir="ltr">PR8</span> چالش شدند.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>یافته</strong>‌<strong>ها: </strong>نتایج نشان داد که تزریق<span dir="ltr">3M2e</span> &nbsp;به تنهایی می‌تواند باعث تولید آنتی بادی اختصاصی شود. ولی همراهی آلوم و <span dir="ltr">CPG</span> میزان بیشتری آنتی‌بادی اختصاصی را در موش‌ها القا کرد، به طوری که اختلاف معنی‌داری با گروه <span dir="ltr">3M2e</span> داشت(05/<span dir="ltr">p<0</span>). آنتی‌بادی‌های فوق بیشتر شامل زیرنوع <span dir="ltr">IgG2a</span> بودند که معمولاً به عنوان شاخصی از فعالیت سلول‌های <span dir="ltr">Th1</span> در نظر گرفته می‌شود<span dir="ltr">.</span> هم‌چنین این گروه از موش‌ها در چالش با ویروس وحشی بهتر محافظت شده بودند (میزان بقای 60 درصد).</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong><span dir="rtl">نتیجه</span></strong><span dir="rtl">‌<strong>گیری: </strong>به کارگیری کمپلکس ادجوانت </span>Alum-CpG<span dir="rtl"> نقش مهمی در برانگیختن ایمنی ذاتی واکتسابی دارد. در این پژوهش نشان دادیم که با افزایش دانسیته </span>M2e<span dir="rtl"> و استفاده از کمپلکس ادجوانت می‌توان پاسخ‌های ایمنی کارآمدی را القا کرد و موش‌ها را در مقابل چالش کشنده با ویروس تا حدی محافظت نمود.</span></p> <p align="right">_&nbsp;</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Background:</em></strong> Influenza A viruses are globally important respiratory pathogens which cause a high degree of morbidity and mortality during annual epidemics. M2 protein which expressed on the viral surface facilitates virus entry to the host cells. The extracellular domain of M2 protein (M2e) consists of N-terminal 24 residue which shows remarkable conservation among all subtypes of influenza A viruses. In this study, we evaluated the immunogenicity of three tandem repeats of M2e along with different adjuvants in BALB/C mice model.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> Recombinant protein (3M2e) was expressed in Escherichia coli and purified. Six weeks old BALB/c mice were immunized interdermally with three doses of 3M2e alone or supplemented with Alum/CpG motif as adjuvant. Control group was injected with PBS. Two weeks after the last immunization, specific anti-M2 was measured using ELISA method and finally mice were challenged with one lethal dose (LD90) of PR8 virus.</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Results:</em></strong> The results showed that 3M2e can induce specific antibody alone. However, 3M2e protein supplemented with Alum-CpG induced higher level of specific antibodies, so that, there was a significant difference with 3M2e group (p<0.05). Anti-M2 antibodies mostly consisted of IgG2a subclass which considered as activity index of TH1 Cells. Moreover, this group showed enhanced protection against wild-type virus (survival rate=60%).</p> <p style="text-align: justify"><strong><em>Conclusion:</em></strong> Applying Alum-CpG as a complex adjuvant may play a crucial role in integrating innate and acquisitive immunity. We increased density of M2e in combination with complex adjuvant and showed that this vaccine induced power immune responses and semi-protected mice against lethal challenge.</p> ویروس آنفلوانزا, پروتئین 3M2e, ادجوانت آلوم, ادجوانت CpG Influenza Virus, 3M2e protein, Alum adjuvant, CPG adjuvant 32 43 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3756-1&slc_lang=fa&sid=1 Hadiseh Shokouhi حدیثه شکوهی 4600319475328460064157 4600319475328460064157 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University,Qom, Iran. گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد قم، قم، ایران. Mohammad Reza Zolfaghari محمدرضا ذوالفقاری 4600319475328460064158 4600319475328460064158 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran. گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد قم، قم، ایران. Behrokh Farahmand بهرخ فرهمند 4600319475328460064159 4600319475328460064159 No Influenza Research Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. آزمایشگاه تحقیقات آنفلوانزا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Mansooreh Tabatabaeian منصوره طباطبائیان 4600319475328460064160 4600319475328460064160 No Influenza Research Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. آزمایشگاه تحقیقات آنفلوانزا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Najmeh Taheri نجمه طاهری 4600319475328460064161 4600319475328460064161 No Influenza Research Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. آزمایشگاه تحقیقات آنفلوانزا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Fatemeh Fotouhi فاطمه فتوحی fotouhi@pasteur.ac.ir 4600319475328460064162 4600319475328460064162 Yes Influenza Research Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. آزمایشگاه تحقیقات آنفلوانزا، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.