fa طراحی و ساخت واکسن DNA چند اپی توپی برای ایجاد ایمنی محافظت کننده علیه ویروس هپاتیت C علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>زمینه و هدف:</strong> تغییرپذیری ویروس هپاتیت <span dir="ltr">C</span> <span dir="ltr">(HCV)</span> مهم‌ترین مشکل در فرآیند تهیه واکسن علیه این عفونت می‌باشد. در این مطالعه تجربی، برای ساخت واکسن حفاظت کننده علیه <span dir="ltr">HCV</span>، ساختار <span dir="ltr">DNA</span> دربرگیرنده اپی‌توپ‌های حفاظت شده از پروتئین‌های ویروسی طراحی و ساخته شد. به منظور تقویت پاسخ ایمنی القاء شده، از خاصیت ادجوانتی انتهای آمین <span dir="ltr">gp96</span> <span dir="ltr">(NT(gp96))</span> استفاده گردید.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>مواد و روش</strong>‌<strong>ها:</strong> واکسن چنداپی توپی <span dir="ltr">(PT)</span> <span dir="ltr">HCV</span> کدکننده چهار اپی توپ ایمونودومینانت لنفوسیت‌های <span dir="ltr">T</span> سیتوتوکسیک (<span dir="ltr">HLA-A2</span> و <span dir="ltr">H2-D^d</span>) از آنتی ژن‌های <span dir="ltr">Core</span>، <span dir="ltr">E2</span>، <span dir="ltr">NS3</span> و <span dir="ltr">NS5B</span>، به همراه یک اپی توپ <span dir="ltr">Th</span> <span dir="ltr">CD4+</span> از <span dir="ltr">NS3</span> و یک اپی توپ <span dir="ltr">B-cell</span> از <span dir="ltr">E2</span> طراحی و ساخته شد. سپس <span dir="ltr">NT(gp96)</span> به <span dir="ltr">DNA PT</span> متصل گردید<span dir="ltr">(PT-NT(gp96))</span>. پاسخ‌های ایمنی سلولی و هومورال برانگیخته شده با ساختار <span dir="ltr">PT</span> و <span dir="ltr">PT-NT(gp96)</span> در مدل موشی مورد ارزیابی قرار گرفت.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>یافته ها: </strong>مطابق سنجش فلوسیتومتری چند رنگی، فراوانی سلول‌های <span dir="ltr">T-CD8+</span> تولیدکننده <span dir="ltr">IFN-&gamma;</span> و <span dir="ltr">TNF-&alpha;</span> در سلول‌های طحال موش‌های ایمن شده با <span dir="ltr">PT-NT(gp96)</span> (6/8 درصد و 4 درصد) نسبت به گروه ایمن شده با <span dir="ltr">PT</span> (0/9 درصد و 8/0 درصد) افزایش معنی‌داری را نشان داد. نتایج مشابهی در بررسی لنفوسیت کبد موش‌های واکسینه شده به دست آمد. میزان <span dir="ltr">IgG</span>، <span dir="ltr">IgG1</span> و <span dir="ltr">IgG2a</span> در موش‌های واکسینه شده با <span dir="ltr">PT-NT(gp96)</span> به طور معنی‌داری از موش‌های ایمن شده با <span dir="ltr">PT</span> بالاتر بود(005/<span dir="ltr">p<0</span>).</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify; margin-right: 28.9pt"><strong>نتیجه گیری: </strong>نتایج نشان داد ساختار <span dir="ltr">PT</span> قادر به القای پاسخ ایمنی در مدل موشی می‌باشد. اتصال <span dir="ltr">NT(gp96)</span> به ساختار <span dir="ltr">PT</span> به طور مؤثری سبب تقویت پاسخ ایمنی هومورال و سلولی علیه <span dir="ltr">HCV</span> در مقایسه با واکسن <span dir="ltr">PT</span> می‌گردد.</p> <p><strong><em>Background:</em></strong> Hypervariability of hepatitis C virus (HCV) proteins is an important obstacle to design an efficient vaccine for the infection. To construct a protective vaccine against HCV, a DNA vaccine containing conserved epitopes of the virus was designed. To enhance the induced immune responses, adjuvant activity of N-terminal domain of gp96 (NT(gp96)) was used.</p> <p><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> A multi-epitope (PT) DNA vaccine encoding four HCV immunodominant cytotoxic T lymphocyte epitopes (HLA-A2 and H2-D^d) from Core, E2, NS3 and NS5B antigens in addition to a T-helper CD4+ epitope from NS3 protein and a B-cell epitope from E2 protein was designed and constructed. Then, NT(gp96) was fused to the PT DNA (PT-NT(gp96)). The stimulated cellular and humoral immune responses of PT and PT-NT(gp96) were evaluated in mice model.</p> <p><strong><em>Results:</em></strong> According to multicolor flow cytometry assay, the frequency of CD8+ T-cells producing IFN&gamma; and TNF&alpha; in the splenocytes of immunized mice with PT-NT(gp96) (6.8%, 4%) was significantly higher than those of immunized with PT (0.9% , 0.8%), respectively. The same results have obtained in hepatic lymphocytes of the vaccinated mice. The level of IgG, IgG1 and IgG2a in the mice vaccinated with PT-NT (gp96) was significantly higher than the value obtained from the mice immunized with PT.</p> <p><strong><em>Conclusion:</em></strong> The results showed that PT DNA vaccine induces immune responses in mice model. Fusion of NT (gp96) to PT DNA vaccine causes to enhance cellular and humoral immune responses against HCV compared to sole PT vaccine.</p> واکسن DNA, اپی توپ, gp96, ویروس هپاتیت C DNA Vaccine, Epitope, gp96, Hepatitis C virus 12 22 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3383-1&slc_lang=fa&sid=1 Leila Pishraft Sabet لیلا پیشرفت ثابت lp_sabet@yahoo.com 4600319475328460064150 4600319475328460064150 Yes Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران. Katayoun Samimi Rad کتایون صمیمی راد 4600319475328460064151 4600319475328460064151 No Department of Virology, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Azam Bolhasani اعظم بوالحسنی 4600319475328460064152 4600319475328460064152 No Hepatitis and HIV Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Mahin Ahangar-Oskouee مهین آهنگر اسکویی 4600319475328460064153 4600319475328460064153 No Department of Microbiology and Virology, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran. گروه میکروب‌شناسی و ویروس شناسی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران.