fa موتاسیون هدف‌مند، کلونینگ و بیان پروتئین استرپتوکیناز به منظور تولید مولکول جدید مناسب برای پگیلاسیون علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle <p dir="rtl" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>زمینه و هدف:</strong> استرپتوکیناز رایج‌ترین و در حال حاضر مقرون به صرفه‌ترین داروی فیبرینولیتیک برای درمان سکته‌های قلبی و گرفتگی رگ‌ها می‌باشد. علی‌رغم مزایا و برتری‌هایی که استرپتوکیناز نسبت به داروهای ترومبولیتیک دیگر دارد، تجویز آن می‌تواند با مشکلاتی از جمله تحریک سیستم ایمنی بدن و هموراژی همراه بوده و هم‌چنین نیمه عمر نسبتا پایین آن منجر به درمان ناقص شود. پگیلاسیون یکی از روش‌های رایج برای اصلاح برخی از این معایب می‌باشد.</p> <p dir="rtl" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>مواد و روش</strong>‌<strong>ها:</strong> در تحقیق حاضر برای طراحی و تولید پروتئینی مناسب برای پگیلاسیون اختصاصی با سیستئین، نرم افزار <span dir="ltr">SPDBviewer</span> استفاده شد. پس از انجام موتاسیون هدف‌مند به روش <span dir="ltr">SOEing PCR</span>، ژن موتانت <em><span dir="ltr">(sk45cys)</span></em> و غیرموتانت (<em><span dir="ltr">ski</span></em>) به درون وکتور <span dir="ltr">pET26-b</span> وارد شده و ساختارهای حاصل به درون اشرشیاکلی ترنسفرم شدند. کلون‌های حاصل پس از رشد توسط <span dir="ltr">IPTG</span> بیان شده و بیان پروتئین‌ها توسط <span dir="ltr">SD-PAGE</span> و وسترن بلاتینگ بررسی گردید. پروتئین‌ها با تکنیک افینیتی کروماتوگرافی با ستون<span dir="ltr">Ni-NTA</span> &nbsp;تخلیص شدند و فعالیت آن‌ها با استفاده از روش کروموژنیک و از طریق سوبسترای <span dir="ltr">S2251</span> بررسی شد.</p> <p dir="rtl" style="margin-right: 28.9pt; text-align: justify;"><strong>یافته</strong>‌<strong>ها:</strong> نتایج حاصل از فعالیت سنجی نشان داد که فعالیت آمیدولیتیک <em><span dir="ltr">sk45cys</span></em> در مقایسه با <em><span dir="ltr">ski</span></em>، پس از 30 دقیقه از تشکیل کمپلکس با پلاسمینوژن، 10 درصد افزایش فعالیت داشته است.</p> <p style="margin-right: 40px; text-align: justify;"><strong><span dir="rtl">نتیجه</span></strong><span dir="rtl">‌</span><strong><span dir="rtl">گیری:</span></strong> <span dir="rtl">نتایج&nbsp; نشان دادند که با توجه به سطحی بودن مکان سیستئین جایگزین شده و هم</span><span dir="rtl">‌</span><span dir="rtl">چنین افزایش نسبی فعالیت </span>SK45cys <span dir="rtl">این پروتئین می</span><span dir="rtl">‌</span><span dir="rtl">تواند مولکول مناسبی برای انجام فرآیند پگیلاسیون اختصاصی باشد.</span></p> <p><strong><em>Background:</em></strong> Streptokinase is one of the most common and cost effective fibrinolytic drugs for treatment of heart attacks and vein thrombosis. Unlike many advantages over other thrombolytic drugs, administration of streptokinase can produce some complications such as immunologic reactions, hemorrhage and incomplete treatment due to relative short half life. Pegylation is one of the most common methods for improving of these shortcomings.</p> <p><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> In this study, designing a proper candidate for specific pegylation with cysteine was done by means of SPDBviewer software. After a meaning ful mutation by SOEing PCR method, mutated (<em>sk45cys</em>) and intact SK (<em>ski</em>) genes were cloned in pET26-b vector and the structures were transformed in E.coli. Clones, Afrer growing, were expressed by IpTG and exptression of proteins was confirmed by SDS-PAGE and western blotting. The proteins were purified by affinity chromatography with NiNTA columns and amidolytic activity of purified proteins was assayed using chromogenic method and different concentrations of S2251 substrate.</p> <p><strong><em>Results:</em></strong> Results of activity assays showed that amidolytic activity of SK45cys had about 10% increase in comparison to Ski, after 30 minutes of complex formation with plasminogen.</p> <p><strong><em>Conclusion:</em></strong> Generally, it was concluded that, considering cys45 as a superficial aminoacid and also relative increase of activity, SK45cys can be considered a suitable protein for specific pegylation.</p> فعالیت سنجی, موتاسیون, پگیلاسیون, استرپتوکیناز Activity assay, Mutation, Pegylation, Streptokinase 1 10 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4051-1&slc_lang=fa&sid=1 Somayeh Bagheri سمیه باقری 4600319475328460064067 4600319475328460064067 No Department of Biology, Payame Noor University, Shahre Rey, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور، شهر ری، ایران. Hossein Maghsoudi حسین مقصودی 4600319475328460064068 4600319475328460064068 No Department of Biology, Payame Noor University, Shahre Rey, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور، شهر ری، ایران. Fatemeh Motevalli فاطمه متولی 4600319475328460064069 4600319475328460064069 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. ، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Farahnaz Khoshdel Nezamiha فرحناز خوشدل نظامیها 4600319475328460064070 4600319475328460064070 No Research and Development Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران،کرج، ایران. Seyed Mehdi Hasanzadeh سید مهدی حسن زاده 4600319475328460064071 4600319475328460064071 No Research and Ddevelopment Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران. Reza Arabi Mianroodi رضا عربی میانرودی arabi552@yahoo.com 4600319475328460064072 4600319475328460064072 Yes Research and Ddevelopment Department, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. بخش تحقیق و توسعه، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران.