Journal of Arak University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك
J Arak Uni Med Sci
Medical Sciences
http://jams.arakmu.ac.ir
46
journal46
1735-5338
2008-644X
fa
jalali
1388
7
1
gregorian
2009
10
1
12
3
online
1
fulltext
fa
مرگ سلولی در نورونهای حرکتی قطعات کشت شده نخاع موش بالغ
Cell death in motor neurons of cultured spinal cord slices in adult mouse
علوم پایه
Basic Sciences
پژوهشي اصیل
Original Atricle
چکیده مقدمه: کشت قطعات نخاع گرفته شده از پستانداران بالغ میتواند به عنوان یک مدل آزمایشگاهی مناسب جهت ارزیابی قابلیت حیات سلولی، بررسی آسیبهای نخاعی و مکانیسمهای دخیل در مرگ سلولی در نظر گرفته شود. در پژوهش حاضر قطعات نخاع موش بالغ مورد استفاده قرار گرفت تا به بررسی نحوه مرگ نورونهای حرکتی در قطعات کشت شده بپردازد. روش کار: طی یک مطالعه تجربی- آزمایشگاهی حاضر ناحیه سینهای نخاع 4 موش بالغ Balb/c توسط دستگاه قطعه کننده بافت به قطعات 400 میکرونی بریده و این قطعات برای دورههای زمانی متفاوت کشت و در انکوباتور دیاکسیدکربن دار در درجه حرارت 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. سپس قطعات تازه تهیه شده (لحظه زمانی صفر) و قطعات کشت شده فیکس و توسط کرایوستت برشگیری شد. برای مطالعه جنبههای مورفولوژیکی و بیوشیمیایی مرگ سلولی، از روشهای رنگ آمیزی فلئورسنت، تکنیک تانل و الکتروفورز ژل آگارز استفاده شد. نتایج: در نورونهای حرکتی قطعات تازه تهیه شده هیچ گونه آثار آپوپتوزیس مشاهده نشد، در حالی که 6 ، 12 و 24 ساعت پس از کشت، این نورونها نشانههای آپوپتوزیس شامل چروکیدگی سلول، متراکم شدن هسته و کروماتین را به نمایش گذاشتند. همچنین 6 و 12 ساعت پس از کشت تانل مثبت بودند. علاوه بر آن DNA استخراج شده از قطعات کشت شده برای 24 ساعت فراگمنتهای نوکلئوزومی DNA را برروی ژل آگارز نشان داد. نتیجه گیری: نتایج موید وقوع آپوپتوزیس در نورونهای حرکتی قطعات کشت شده نخاع موش بالغ می باشد.
Abstract Background: Spinal cord slices culturing from adult mammals could be considered as a suitable in-vitro model for evaluating cellular viability, spinal cord injury and cell death mechanisms. In present study, determining of cell death in motor neurons of cultured spinal cord slices in adult mouse was done. Materials and Methods: In a experimental- laboratory study, thoracic regions of spinal cords from 4 Balb/c mice were cut into 400-µm slices using tissue chopper and incubated in a Co2 incubator at 37˚C for different periods of time. Freshly prepared slices (0h) and cultured slices were fixed and sectioned using cryostat. To study morphological and biochemical features of cell death, fluorescent staining, TUNEL method and agarose gel electrophoresis were used. Results: In freshly prepared slices of motor neurons showed no apoptotic changes. While, 6, 12 and 24h after culturing, this neurons displayed morphological features of apoptosis including cell shrinkage as well as nuclear and chromatin condensation. Also, 6 and 12h after culturing were TUNEL positive. In addition, extracted DNA from cultured slices for 24h were indicated the nucleosomal DNA fragmentation on agarose gel electrophoresis. Conclusion: Results were showed the occurrence of apoptosis in motor neurons of cultured adult mouse spinal cord slices.
واژگان کلیدی: آپوپتوزیس، قطعات نخاع، نورون حرکتی، موش Balb/c
Keywords: Apoptosis, Spinal cord, Motor neuron, Balb/c mouse
39
46
http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-518-1&slc_lang=fa&sid=1
Malek
Soleimani Mehranjani
ملک
سلیمانی مهرنجانی
m-soleimani@araku.ac.ir
460031947532846008343
460031947532846008343
Yes
Hamid Reza
Momeni
حمید رضا
مومنی
h-momeni@araku.ac.ir
460031947532846008344
460031947532846008344
No
Mohammad Hosein
Abnosi
محمد حسین
آبنوسی
m-abnosi@araku.ac.ir
460031947532846008345
460031947532846008345
No
Parva
Nasimi
پروا
نسیمی
460031947532846008346
460031947532846008346
No