fa تخلیص پروتئین نوترکیب زیر واحد بتای انتروتوکسین ویبریو کلرا علوم پایه Basic Sciences پژوهشي اصیل Original Atricle زمینه و هدف: زیر واحد بتای انتروتوکسین ویبریو کلرا بخش غیرسمی و پنتامریک محسوب می‎شود که این بخش مسئول اتصال هولوتوکسین به گیرنده گانگلیوزید GM1 واقع در سلول‎های هسته‎دار است. در این بررسی سعی شد زیر واحد بتای توکیسن ویبریوکلرا در سیستم پروکاریوتی تولید، تخلیص و تأیید گردد. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی ابتدا حامل نوترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا pET-28a قابل القاء در داخل سویه بیانی اشرشیاکلی (BL21) طراحی و ساخته شد. سپس سویه بیانی تحت تأثیر ایزوپروپیل- بتا- دی- تیوگالاکتو پیرانوزید القاء و پروتئین نو ترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا در مقیاس کوچک و بزرگ تولید شد. پروتئین نوترکیب تولید شده بااستفاده از ستون رزین نیکل پس از چند برابر شدن بدون آلودگی با زیر واحد A توکسین استخراج شد. در انتها پروتئین نوترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا استخراج و تخلیص شده با آزمایش وسترن بلاتینگ تأیید نهایی شد. یافته‎ها: میزان تخلیص پروتئین نوترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا با این روش حدود 480 میکروگرم به ازای هر لیتر از محیط القاء شده بود. آزمایش وسترن‌بلاتینگ نیز نشان داد پروتئین نوترکیب تخلیص شده به طور قوی و اختصاصی با آنتی بادی ضد انتروتوکسین ویبریو کلره واکنش می‎دهد. نتیجه‎گیری: اشرشیاکلی می‎تواند میزبان قابل دسترسی برای تولید پروتئین نوترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا باشد. همچنین می‎توان از وکتور و میزبان طراحی شده برای تولید انبوه این پروتئین استفاده کرد. Background: Vibrio cholera toxin B (CTB) subunit is the pentameric non-toxic portion of cholera toxin (CT) which is responsible for the holotoxin binding to the GM1 ganglioside receptor present on nucleated cells. this study was to produce, purify, and verify recombinant CTB (rCTB) subunitin prokaryotic system. Materials and Methods: In this experimental study, rCTB expression vector (pET-28a) which could be induced in E. coli (BL21) was designed and synthesized. Then the recombinant expression strains containing the result of IPTG interaction were induced and the rCTB was generated on small and large scales. The rCTB produced through Ni2+-charged resin, after refolding and free of possible CTA contaminants, was extracted. After purification, rCTB was verified by Western blotting. Results: The results indicated the level of purification to be about 480µg of purified active pentameric rCTB for each liter of the induced culture. Also, Western blotting analysis showed that recombinant CTB is strongly and specifically recognized by polyclonal antibodies against the cholera toxin. Conclusion: The findings of this study demonstrated that E.coli is an available host for production of CTB. In addition, the designed host and vector can be used in large scale production of this protein تخلیص، توکسین وبا، وسترن بلاتینگ، پروتئین نو ترکیب زیر واحد بتای توکسین ویبریوکلرا (rCTB) Cholera Toxin, Purifying, Rctb, Western Blotting 27 35 http://jams.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-789-1&slc_lang=fa&sid=1 Habib Zeighami حبیب ضیغمی 4600319475328460013154 4600319475328460013154 No morteza Sattari مرتضی ستاری Sattarim@modares.ac.ir 4600319475328460013155 4600319475328460013155 Yes Mehdi Rezayat سید مهدی رضایت 4600319475328460013156 4600319475328460013156 No